電泳原理
電泳根據(jù)分子的大小,電荷或其他特性沿梯度將其分離。該梯度可以是電場,或者在變性梯度凝膠電泳(DGGE)的情況下,可以是變性劑,例如尿素和甲酰胺的混合物。如果帶負(fù)電荷,蛋白質(zhì)將向陽極遷移,如果帶正電荷,則蛋白質(zhì)將向陰極遷移。由于大分子的遷移要比小分子慢,因此科學(xué)家可以測量行進(jìn)的距離并使用對數(shù)確定碎片的大小。
緩沖區(qū)的作用
在電泳基于電荷分離的情況下,緩沖液中的離子會傳輸分離所需的電荷。通過提供弱酸和弱堿的緩沖液,緩沖液還將pH值保持在狹窄的范圍內(nèi)。這很重要,因為蛋白質(zhì)或核酸的結(jié)構(gòu)和電荷在pH發(fā)生明顯變化時會發(fā)生變化,從而阻止了正確的分離。